熒光定量PCR服務

熒光定量PCR技術是普通PCR技術的改良和發展,它提高了普通PCR技術的特異性和準確性,能做到實時監控和準確定量,廣泛應用于基礎研究、臨床檢驗、海關商貿檢疫等各個領域。

熒光定量PCR技術優勢

l 靈敏度高,可以檢測低拷貝的目的基因;

l 高精度,PCR擴增階段包括3個階段:指數增長期,線性增長期和平臺期,96個重復指數增長期表現出高精度,而平臺期則變化差異較大;

l 定量能力強,簡單的流程就能得到高質量的定量數據;

l 動力學范圍寬,可以精確定量9個數量級的差異;

l 速度快,節省時間和勞力,不需要電泳檢測;

l 安全,使用熒光染料發光,不用EB或放射性物質,極大降低對實驗人員健康的威脅;

l 重復性好。

 

服務內容 核酸提取和反轉錄

根據客戶要求提取動物、植物、細胞和細菌等樣品DNA或RNA

對所提RNA進行反轉錄以用于熒光定量PCR反應;


合成

設計合成各種引物并可根據客戶要求負責引物的調試;

針對不同引物構建標準品用于絕對定量或相對定量實驗;

設計合成各種標記探針并可根據客戶要求負責探針的調試。

 

檢測

l mRNA表達檢測

l MicroRNA表達和靶基因表達檢測

l SNP檢測

l 基因copy數檢測

l 病原微生物樣品檢測

 

研發

接受采用熒光定量PCR的檢測方法針對各種檢測目標的合作研發和委托研發。

 

檢測方法

捷瑞提供兩種PCR檢測方法服務:SYBR Green I染料法和TaqMan/MGB探針法。

 

一、染料法:SYBR Green Ⅰ

游離狀態下的SYBR Green分子發出微弱的熒光信號,當與dsDNA雙螺旋小溝區域結合時,則發出綠色熒光,可在520nm波長下檢測熒光信號,熒光信號的強度與dsDNA數量呈正相關。

SYBR Green Ⅰ染料法的特點:

高靈敏度,低背景信號,操作簡單,不影響酶促反應,價格便宜。

 

 

二、探針法:TaqMan熒光探針/ MGB探針

TaqMan 熒光探針是一種寡核苷酸探針,熒光基團連接在探針的5`末端,一般用FAM、VIC、HEX、Cy3、Cy5等熒光基團,而淬滅劑則在3`末端,一般為TAMRA、BHQ1、BHQ2等,其中TAMRA發出黃色熒光,BHQ1和BHQ2不發出熒光。PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步。

 

 

TaqMan-MGB探針與普通TaqMan熒光探針相比具有更短的序列和更高的序列特異性,常被用于SNP分型的研究中,有望成為基因診斷和個體化用藥分析的首選技術平臺。

 

探針法的特點:

與染料法相比具有更低的背景信號,更高的靈敏度,可以檢測低于10個分子的模板,更高的特異性,結果也更準確。同時也具有染料法的操作簡單,不影響酶促反應等優點。

 

捷瑞服務優勢:

* 在上海、北京、廣州、南京、杭州設立引物合成基地,擁有高品質、高通量TaqMan探針和MGB探針合成能力;

* 專業客戶團隊為您提供方案咨詢、優化、引物設計和結果分析服務;

* 擁有多臺ABI7900、ABI7500大通量熒光定量PCR實驗平臺;

* 可為客戶提供更為快速準確、價格更加合理的探針法定量PCR服務。


服務流程

PCR引物和探針設計合成及調試→標準品制作→樣本核酸抽提→反轉錄→熒光定量PCR擴增檢測→數據匯總和初步分析


溫馨提示:下單流程

捷瑞網站首頁→訂單下載→下載熒光定量PCR服務訂單→填寫完整實驗信息→發送至[email protected]

 

客戶需要提供信息

詳細的實驗要求,基因名稱(提供Gene ID),待測樣本(清晰樣品編號),保證樣本質量。

 

送樣要求

細胞(≥105個);組織(≥100mg,黃豆大?。?;全血(≥0.5ml);基因組DNA(≥5ug)

 

檢測周期

常規檢測任務2-3周內完成,具體時間根據要檢測的基因和樣本數而定。

 

報告內容

提供電泳圖片、熒光擴增曲線、標準曲線、熔解曲線、原始數據、實驗報告等。

注:可到登陸捷瑞公司首頁→技術支持→技術資料 →下載定量檢測報告示例。


 

  

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